Immunosenescenza nella sclerosi multipla: studio del fenotipo natural killer

Abstract

La sclerosi multipla (SM) è una malattia immuno-mediata del sistema nervoso centrale. Sebbene la SM sia considerata una malattia del giovane adulto, negli ultimi anni l’età media di prevalenza è aumentata. Tuttavia, la popolazione SM di età maggiore a 60 anni è poco studiata, in particolare per quanto riguarda il funzionamento del sistema immunitario, che è il target delle terapie approvate. Questa tesi ha avuto l’obiettivo di studiare il fenotipo delle cellule natural killer, linfociti del sistema immunitario il cui ruolo regolatorio è compromesso nella SM, nelle persone con SM di età > 60 anni, rispetto a quelle di età < di 40 anni. Abbiamo arruolato 59 pazienti, di cui 39 con età > 60 anni e 17 con età < 40 anni. I pazienti sono stati sottoposti a prelievo ematico da cui abbiamo isolato e crioconservato i PBMCs. Per lo studio del fenotipo NK, abbiamo messo a punto un pannello citofluorimetrico, marcato i PBMCs dopo scongelamento e acquisito i campioni al citofluorimetro FACSymphony A3. L’analisi dei dati è stata fatta con FlowJo. Abbiamo osservato un aumento delle cellule NK e delle cellule NK CD56dim nei pazienti con SM di età > 60 anni rispetto a quelli di età < 40 anni, e, parallelamente, una diminuzione delle cellule NK CD56bright. Le cellule NK nei pazienti anziani hanno mostrato un fenotipo senescente, con alta espressione di CD57 e bassa espressione di KLRG1. L'analisi Flowsom ha identificato nei pazienti con età superiore ai 60 anni una popolazione NK atipica, con alta espressione di marcatori di attivazione ma fenotipo non completamente differenziato. Se confermati in coorti più ampie di pazienti, i dati di questa tesi contribuiranno a caratterizzare la funzione immunitaria delle persone con SM di età > 60 anni, allo scopo di validare biomarcatori di invecchiamento immunitario o di identificare target terapeutici specifici per le persone con SM a diverse età.

Multiple sclerosis (MS) is an immune-mediated disease of the central nervous system. Although MS is considered a disease of young adults, in recent years the average age of prevalence has increased. However, the MS population over 60 years of age is poorly studied, particularly with regard to the functioning of the immune system, which is the target of approved therapies. This thesis aimed to study the phenotype of natural killer (NK) cells, lymphocytes of the immune system whose regulatory role is compromised in MS, in people with MS over 60 years of age, compared to those under 40 years of age. We enrolled 59 patients, of whom 39 were over 60 years of age and 17 were under 40 years of age. The patients underwent blood sampling from which we isolated and cryopreserved the PBMCs. For the NK phenotype study, we developed a cytometry panel, stained the PBMCs after thawing, and acquired the samples on the FACSymphony A3 flow cytometer. Data analysis was performed using FlowJo. We observed an increase in NK cells and CD56dim NK cells in patients with MS over 60 years of age compared to those under 40 years of age, and, conversely, a decrease in CD56bright NK cells. NK cells in elderly patients exhibited a senescent phenotype, with high expression of CD57 and low expression of KLRG1. Flowsom analysis identified an atypical NK population in patients over 60 years of age, with high expression of activation markers but an incompletely differentiated phenotype. If confirmed in larger cohorts of patients, the data from this thesis will help characterize the immune function of people with MS over 60 years of age, with the aim of validating biomarkers of immune aging or identifying specific therapeutic targets for people with MS at different ages.