Vescicole extracellulari da plasma come terapia mirata: funzionalizzazione della membrana e caricamento del farmaco

Abstract

Lo scopo di questa tesi è stato quello di standardizzare un protocollo di ingegnerizzazione di vescicole extracellulari (EVs) da plasma. Per raggiungere questo obiettivo, abbiamo innanzitutto selezionato un protocollo di isolamento delle EVs che rappresentasse il compromesso ottimale tra purezza e resa. Poi, abbiamo impostato la funzionalizzazione della membrana delle EVs mediante la reazione di copper-free click chemistry con l'obiettivo di colpire una proteina specifica, ovvero l'isoforma onco-fetale della fibronectina contenente il dominio EDB, espressa nell'ambiente tumorale nelle prime fasi del processo tumorigenico. Inoltre, abbiamo standardizzato il caricamento di un farmaco terapeutico (PTX) all'interno delle EVs funzionalizzate.

The aim of this thesis was to standardize a protocol of plasma-EV engineering. To achieve this goal, we first selected an EV isolation protocol representing the optimal compromise between purity and yield. Then, we set up the EV membrane functionalization by copper-free click chemistry with the aim of targeting a specific protein, namely the onco-fetal isoform of fibronectin containing the EDB domain, expressed in the tumor environment in the early phases of the tumorigenic process. Moreover, we also standardized the loading of a therapeutic cargo (PTX) within functionalized EVs.