Processing della subunità regolatoria da parte della calpaina 1 e 2 purificate da cellule di sangue periferico umano (PBMC).
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Author
Para, Alessia <1997>
Date
2021-12-16Data available
2021-12-23Abstract
L’enzima proteolitico Ca2+-dipendente calpaina, è un eterodimero costituito da una subunità catalitica di 80 kDa e da una subunità regolatoria più piccola di 30 kDa (CSS1) associata all’enzima nella condizione nativa. In seguito all’esposizione agli ioni calcio, CSS1 si dissocia dalla subunità catalitica e viene digerita dall’enzima in frammenti discreti. Esistono diverse isoforme della calpaina, alcune delle quali sono tessuto-specifiche. Gli enzimi che sono stati utilizzati in questo studio sono stati purificati da sangue periferico umano, sono ubiquitari, e sono la calpaina-1 e -2.
In particolare, si è indagato se la subunità regolatoria è processata in modo diverso in sistemi ricostruiti utilizzando come “substrato” delle calpaine, la subunità regolatoria ricombinante umana purificata da batteri. L’interesse di questi esperimenti deriva da evidenze sperimentali che associano un’aumentata espressione di CSS1 alla malignità in tumori del sistema nervoso centrale. Calpain is a Ca2+-dependent protease heterodimer constituted by a catalytic 80 kDa subunit and a regulatory 30 kDa subunit (CSS1) that is associated to the enzyme in the native condition. When [Ca2+] is increased, CSS1 dissociates from the catalytic subunit and is digested by the protease in discrete fragments. Calpain exists in several isoforms that can even be tissue-specific. In these studies we have used calpain-1 and -2, which are ubiquitous and the most studied isoforms, purified from peripheral blood mononuclear cells. Specifically we have investigated whether CSS1 is differently processed by these two calpains, and we have used as “substrate” the human regulatory subunit produced as recombinant protein by E. Coli. Our investigations were suggested by previous experimental evidences indicating that an increased expression of CSS1 is associated to tumor malignancy in the central nervous system.
Type
info:eu-repo/semantics/masterThesisCollections
- Laurea Magistrale [3937]