Analisi del repertorio linfocitario in pazienti con tumori gastrici mediante citometria di massa e correlazione con la risposta alla chemioterapia perioperatoria.

Abstract

Background: Il trattamento del tumore gastrico localizzato coinvolge la chirurgia e la chemioterapia (CT) perioperatoria, ma la prognosi rimane sfavorevole. Negli ultimi anni l’immunoterapia associata alla CT ha dato segnali positivi. L’uso degli inibitori dell’immuno-checkpoint (ICI) richiede un’accurata caratterizzazione del repertorio linfocitario. Scopo: Il nostro studio si prefigge di caratterizzare con la citometria di massa i linfociti T ed NK nel sangue periferico (PB), nel tessuto patologico e sano di pazienti affetti da tumore gastrico, per valutare la risposta alla CT e individuare potenziali fattori prognostici. Metodi: Abbiamo analizzato con citometria di massa 4 pazienti sottoposti a regime FLOT e 5 donatori sani compatibili per età e sesso. Il PB è stato raccolto prima della CT (PRE), prima del terzo ciclo (T), all’intervento (INT) e durante il quinto ciclo (POST). È stato analizzato il tessuto tumorale di un solo paziente. Risultati: Abbiamo identificato 32 clusters di cellule mononucleate CD45+, 30 di linfociti T e 16 di linfociti NK. Abbiamo trovato rare popolazioni CD4/CD8 Treg e T follicolari (Tfh). L’analisi delle cellule NK ha identificato i subsets CD56bright, CD56dim e CD56dimCD57+ “adaptive”. Le cellule NK nel PB non esprimono PD-1. I pazienti al PRE hanno mostrato un aumento delle cellule NK CD56bright CXCR5+TIGIT+ e dei linfociti T CD4 PD-1+TIGIT+ rispetto ai donatori sani. Confrontando gli intervalli PRE/INT/POST, il repertorio dei pazienti rimane stabile nel tempo. I pazienti differiscono per il repertorio linfocitario e per la risposta tissutale. Conclusioni: La citometria di massa è un valido strumento per analizzare le cellule T e NK nei pazienti con tumore gastrico. TIGIT è espresso sia da linfociti T che NK, rappresentando un buon bersaglio degli ICI. La CT non modifica il repertorio linfocitario. Sono necessarie ulteriori analisi per valutare una possibile correlazione tra il repertorio linfocitario e la risposta tissutale.

Background: The treatment of localized gastric cancer involves surgery and perioperative chemotherapy (CT), but the prognosis remains unfavorable. Recently, immunotherapy combined with CT has shown positive signals. The use of immune checkpoint inhibitors (ICI) requires accurate characterization of the lymphocyte repertoire. Aim: Our study aims to characterize T and NK lymphocytes in peripheral blood (PB), tumor tissue and healthy tissue of gastric cancer patients using mass cytometry, to evaluate the response to CT and identify potential prognostic factors. Methods: We analyzed 4 patients undergoing FLOT CT and 5 age/sex-matched healthy controls (HC) using mass cytometry. PB was collected before CT (PRE), before the third cycle (T), at surgery (INT), and during the fifth cycle (POST). We analyzed the tumor tissue from only one patient. Results: We identified 32 clusters of CD45+ mononuclear cells, 30 of T lymphocytes, and 16 of NK lymphocytes. We found rare populations of CD4/CD8 Tregs and follicular T (Tfh) cells. The analysis of NK cells identified the CD56bright, CD56dim, and CD56dim CD57+ "adaptive" subsets. NK cells in PB do not express PD-1. Patients at PRE showed an increase in CD56bright CXCR5+TIGIT+ NK cells and CD4 PD-1+TIGIT+ T lymphocytes compared to HC. Comparison between PRE/INT/POST intervals showed no significant CT-mediated effect. Differences in T and NK cells were detectable among patients who displayed a different tissue response at surgery. Conclusions: Mass cytometry is a valid tool for analyzing T and NK cells in gastric cancer patients. TIGIT is expressed by both T and NK lymphocytes, representing a good target for ICI. We found no significant changes in immune cell profiles during perioperative CT. Further analyses are necessary to evaluate a possible correlation between the lymphocyte repertoire and tissue response.