Studio degli autoanticorpi anti-antigeni ipotalamici nei pazienti affetti da narcolessia

Abstract

Introduzione: L’eziologia autoimmune della narcolessia è supportata dall’associazione con l’allele HLA-DQB1*06:02. È stata dimostrata la reattività di linfociti T contro i neuroni orexinergici, è però possibile un coinvolgimento dell’immunità umorale. Obiettivo dello studio è ricercare in pazienti affetti da narcolessia tipo 1 (NT1) e 2 (NT2) la presenza di anticorpi sierici reattivi contro neuroni ipotalamici di primate. Metodi: Sono stati reclutati pazienti NT1 e NT2 e controlli sani in tre centri italiani: IRCCS Ospedale Policlinico San Martino, IRCCS Ospedale Gaslini e ASST Grande Ospedale Metropolitano Niguarda. I soggetti hanno eseguito un test di immunofluorescenza indiretta (IFI) su siero, che è stato diluito con rapporto 1:10 e analizzato su una sezione di ipotalamo di primate. Sono stati utilizzati anticorpi anti-Ig umane coniugati con fluoresceina. L’intensità di fluorescenza è stata valutata tramite scala visiva (VS) da 0 a 3 (0 nessuna reazione, 1 fluorescenza debole, 2 fluorescenza intermedia, 3 fluorescenza marcata). I campioni sono stati ritenuti positivi con punteggi VS2 o VS3. Risultati: Sono stati arruolati 19 pazienti (17 NT1 e 2 NT2; 29.9 ± 15.8 anni (12-63); 8 femmine) e 22 soggetti sani (18-54 anni). La positività all’IFI è risultata significativamente superiore nei pazienti rispetto ai controlli (p<0.001), con 100% specificità e 84.2% sensibilità. Nel dettaglio, 16 pazienti hanno mostrato immunoreazione (8 VS3, 8 VS2), 3 sono stati valutati con punteggio VS1 e nessuno VS0. Dei 22 controlli, nessuno ha mostrato IFI positiva, 5 hanno mostrato debole fluorescenza (VS1) e 17 nessuna reazione (VS0). Discussione: Nel nostro studio, la maggior parte dei pazienti affetti da narcolessia ha mostrato la presenza di anticorpi sierici reattivi contro antigeni ipotalamici, assenti nel gruppo di controllo. Ulteriori studi saranno necessari per confermare il risultato e determinare la sede degli antigeni ipotalamici e la natura degli autoanticorpi.

Introduction: In narcolepsy it was found an association with the HLA DQB1*06:02 haplotype that strongly suggest an autoimmune basis. Many studies have shown T-cells reactivity against orexin neurons, but a humoral mechanism might be involved. The aim of this study was to search for autoantibodies against primate hypothalamic neurons in narcolepsy type 1 (NT1) and 2 (NT2). Methods: NT1, NT2 patients and healthy controls were enrolled in three Italian centers: IRCCS Ospedale Policlinico San Martino, IRCCS Ospedale Gaslini e ASST Grande Ospedale Metropolitano Niguarda. All subjects underwent indirect immunofluorescence analysis on peripheral blood samples, that was analysed at a serum dilution of 1:10 on a section of primate hypothalamus. A pool of conjugate fluorescent anti-human IgM and IgG was used as detecting antibodies. Intensity of fluorescence was determined by a visual scale (VS) score from 0 to 3 (0 no reaction, 1 weak fluorescence, 2 intermediate fluorescence, 3 strong fluorescence). Sample was positive if score VS2 or VS3. Results: 19 patients affected by Narcolepsy (17 NT1 and 2 NT2; 29.9 ± 15.8 yo (12-63), 8 females) and 22 healthy volunteers (18-54 yo) were enrolled. The immunofluorescence was significantly higher in patients that controls (p<0.001), with 100% specificity and 84.2% sensitivity. In detail, 16 patients showed a positive immunoreaction (8 with VS3, 8 with VS2), 3 patients showed a VS score of 1 (2 NT1 and 1 NT2) and no one had VS0 (no reaction). Among the 22 healthy controls, 5 showed a weak fluorescence (VS1) and the remaining no reaction (VS0). Discussion: The majority of the tested narcoleptic patients showed autoantibody reactivity against hypothalamic antigens, while the control group did not. Further evidence is needed to confirm our result, including analysis to better define the localization of antigen and the nature of antibodies.