La malattia di Graves: studio preliminare per la messa a punto di un nuovo metodo di diagnosi precoce.

Abstract

Il morbo di Graves è la forma più comune di ipertiroidismo autoimmune con un’incidenza di 50 persone ogni 100 000. Colpisce prevalentemente soggetti di sesso femminile di età compresa tra i 30 e i 50 anni. La malattia può degenerare in una serie di problematiche di salute quali: oftalmopatia, irregolarità del ciclo mestruale per i pazienti femminili, perdita di peso e alterazione dell’umore. Attualmente esistono delle tecniche diagnostiche che permettono un’individuazione della malattia sebbene debbano essere eseguiti più esami prima di poter accertare l’effettiva presenza del Morbo di Graves. L’obbiettivo del progetto di ricerca che ho seguito presso “The Technical University of Denmark” (DTU) e la Novo Nordisk, A/L sito di Måløv, è stato quello di mettere a punto un nuovo sistema di diagnosi preciso e che soprattutto permetta il riconoscimento della malattia anche agli stadi iniziali. L’idea è quella di impiegare peptidi sintetici riprodotti a partire da specifiche sequenze del recettore per la tireotropina (“TSHR”), direttamente coinvolto nella patologia, che possano essere riconosciuti dagli auto-anticorpi presenti nel siero dei pazienti, e che colpiscono, attivandolo patologicamente, proprio il recettore TSHR. Per prima cosa, dunque, sono state studiate quali regioni del recettore potessero essere coinvolte dal legame con gli anticorpi. Successivamente sono stati ricreati in laboratorio mediante la SPPS (Solid Phase Peptide Synthesis) e purificati mediante HPLC/UPLC, 11 peptidi che richiamassero tali sequenze. Infine, sono stati eseguiti test ELISA per validare la reattività dei peptidi verso gli anticorpi presenti nel siero dei pazienti affetti dal Morbo di Graves.

Graves' disease is the most common form of autoimmune hyperthyroidism with an incidence of 50 people per 100,000. It mainly affects women between the ages of 30 and 50. The disease can degenerate into a number of health problems such as: ophthalmopathy (exophthalmos and diplopia), irregular menstruation for female patients, weight loss and mood alteration. Currently, there are diagnostic techniques that allow for the identification of the disease, although more tests must be performed before the actual presence of Graves' disease can be ascertained. The aim of the research project that I followed at "The Technical University of Denmark" (DTU) and Novo Nordisk, A / L site in Måløv, was to develop a new precise diagnosis system allowing the recognition of the disease even in the initial stages.

The idea is to use synthetic peptides reproduced, starting from specific sequences of the receptor for thyrotropin ("TSHR") that can be recognized by the auto-antibodies present in the patient's serum, and which affect the TSHR receptor activation, during the pathology. First, therefore, it was investigated which regions of the receptor could be involved in binding to the antibodies. Subsequently, 11 peptides, mimicking these sequences, were synthetized in the laboratory by means of SPPS (Solid Pha-se Peptide Synthesis) and purified by HPLC/UPLC. Finally, ELISA tests were performed to validate the reactivity of the peptides to the antibodies present in the serum of patients affected by Graves' disease.