Sequenziamento di TP53 nei carcinomi sierosi ovarici di alto grado ad immunofenotipo null

Abstract

Introduzione La P53,definita “guardiano del genoma”, regola il ciclo cellulare e, in condizioni di stress, attiva la riparazione del danno al DNA,senescenza e apoptosi.Mutazioni a livello di p53 ostacolano la funzione wild type e pongono le basi per la cancerogenesi:infatti, p53 è il gene mutato più comune nel cancro.P53 è, inoltre, alla base della patogenesi del carcinoma sieroso ovarico di alto grado(HGSOC), comune cause di morte nel sesso femminile. In questo studio sono stati presi in considerazione i tumori sierosi con immunofenotipo nullo, cioè con perdita di espressione di p53 all’immunoistochimica(IHC), per valutare la correlazione tra IHC e analisi molecolare. Metodi Sono stati analizzati FFPE di tumori ovarici provenienti da interventi chirurgici di debuking e LPS tra il 2018 e il 2020 per valutare l’istologia e l'IHC.I blocchetti sono stati studiati mediante la tecnica di Sanger, un gold standard per il sequenziamento di p53. Risultati Tra i 20 casi analizzati, 17 con immunofenotipo null e 3 casi controllo con overespressione e espressione focale di p53,16 presentano mutazioni nonsenso, frameshift e splice site che portano a la formazione di un codone di stop prematuro e attività funzionale nulla.3 casi mantengono il fenotipo wild type:2 all’IHC presentano espressione focale di p53 (5% e 20%), mentre 1 caso senza mutazione mostra immunofenotipo nullo,a causa del coinvolgimento di vie di segnalazione a monte e a valle del gene.Il caso con over-espressione di p53 all’IHC presenta una mutazione missenso.Infine,13 mutazioni risiedono tra gli esoni 5-8 (cioè il dominio di p53 maggiormente soggetto a mutazioni),2 a livello dell’esone 4; una tra l’esone 8-9. Conclusioni Il sequenziamento di p53 permette di riscontrare mutazioni specifiche di p53 e di proporre al paziente terapie target personalizzate. Inoltre, l’IHC ha mostrato mutazioni in caso di immunofenotipo nullo quindi può essere considerato un forte marker surrogato per valutare tp53 in HGSOC.

Introduction P53,the "guardian of the genome", regulates the cell cycle and, under stressful conditions,activates DNA-repair,senescence and apoptosis. Tp53 mutations hinder wild type function and lay the foundation for carcinogenesis: in fact, p53 is the most common mutated gene in human cancer.P53 is also correlated to the pathogenesis of high grade ovarian serous carcinoma(HGSOC), a major cause of death in women. In this study, HGSOC with null-immunophenotype, i.e. with loss of expression of p53 to immunohistochemistry(IHC), were considered, to evaluate correlation between IHC and molecular analysis. Methods FFPEs from ovarian tumors from debunking and LPS in the period 2018-2020 were analyzed through histology and IHC.The blocks were then studied using the Sanger technique, a gold standard for p53 sequencing. Results 20 cases of ovarian cancer were analyzed:16 patients showed p53 nonsense, frameshift and splice site mutations that resulted in the formation of a premature stop codon and loss of functional activity.3 patients maintained the wild type phenotype: 2 cases at IHC presented the focal expression of p53 (5%, 20%), while 1 case without mutation showed null-immunophenotype, probably due to the involvement of p53 upstream and downstream signaling pathway.The patient with over-expression of the gene to IHC showed a missense mutation.Finally, 13 mutations were found in exon 5-8, the most common domain mutated in p53; 2 mutations were found in exon 4; 1 mutation was found between exons 8-9.

Conclusions P53 sequencing, used in Leukemia for the role of p53 in prognosis, allows to detect specific mutations of p53 and, consequently, to propose to the patient personalized target therapies. Moreover, IHC always demonstrated mutation in null-immunophenotype and, for this reason, it can be considered an important surrogate marker to evaluate TP53 in HGSOC.