Studio della vulnerabilità sinaptica nel modello SAMP8 mediante analisi citofluorimetrica di sinaptosomi isolati

Abstract

I sinaptosomi sono strutture vescicolari ottenibili dalle terminazioni sinaptiche, di cui conservano le principali componenti strutturali e funzionali, risultando pertanto un valido modello per analizzare la funzionalità sinaptica, ma in vitro. Il presente lavoro di tesi propone la loro analisi citofluorimetrica al fine di valutare la resilienza sinaptica a stimoli neurotossici in un modello murino di senescenza accelerata, (SAMP8). I sinaptosomi isolati sono stati esposti separatamente a rotenone e a glutammato (10-5 M e 10-4 M, per un’ora a 37ºC), per indurre rispettivamente stress mitocondriale ed eccitotossicità. La loro vitalità è stata valutata mediante doppia marcatura con calceina e ioduro di propidio. L’analisi citofluorimetrica delle particelle isolate ha dimostrato un’effettiva differenza nella risposta nei due modelli: il modello SAMP8 mostra una maggiore vulnerabilità, in particolare nei confronti del glutammato, verso il quale le sue terminazioni nervose evidenziano una minore capacità di resilienza.

Synaptosomes are vesicular structures obtainable from synaptic terminals, retaining all their main structural and functional components, making them a valuable in vitro model for investigating synaptic responses. This study proposes their flow cytometric analysis to evaluate synaptic resilience to neurotoxic stimuli in a senescence-accelerated mouse model, (SAMP8). The isolated synaptosomes were separately exposed to rotenone and glutamate (10-5 M and 10-4 M, for 1 h at 37ºC) to induce mitochondrial stress and excitotoxicity, respectively. Their viability was evaluated using double staining with calcein and propidium iodide. Flow cytometric analysis of the isolated particles revealed a clear difference in response between the two models: SAMP8 exhibited greater vulnerability, particularly toward glutamate, as its nerve terminals showed reduced resilience to this agent.