Il surnatante delle cellule umane epiteliali dell'amnion modula le funzioni delle cellule NK.

Abstract

Le cellule umane epiteliali dell’amnion (hAEC) rivestono lo strato epiteliale della membrana amniotica e possono essere raccolte alla fine della gravidanza. Recentemente, le hAEC hanno suscitato interesse per la loro pluripotenza e le proprietà immunomodulatorie, nonché per la facile accessibilità e le modalità di applicazione non invasive. Le hAEC esercitano funzioni immunomodulatorie in parte per la produzione di citochine, per la bassa espressione di HLA A-B-C, per la presenza di molecole HLA di classe I non classiche come HLA-G e di ectoenzimi adenosinergici. Anche le cellule natural killer (NK), che fungono da ponte tra immunità innata e adattativa, sono essenziali durante la gravidanza per la modulazione dell’infiammazione. In questo studio abbiamo analizzato gli effetti immunomodulatori dei suvranatanti delle hAEC (hAES) sulle cellule NK in termini di modulazione della proliferazione, espressione dei recettori attivatori/inibitori e citotossicità contro le linee cellulari umane K562 (leucemia) e HTLA230 (neuroblastoma). In questo studio abbiamo dimostrato che gli hAES modulano le funzioni NK in termini di i) inibizione della proliferazione, ii) down-modulazione di CD57, CD16, NKG2C e TIGIT, iii) up-regolazione di NKG2A, NKp30, NKp44 e NKp46 e iv) aumento della citotossicità. L’anticorpo bloccante HLA-G ha ripristinato significativamente la proliferazione delle NK ma non ha influenzato il fenotipo e la citotossicità. Per comprendere se fattori solubili o vescicole extracellulari (EV) fossero coinvolti nella modulazione dei recettori NK, abbiamo ripetuto gli esperimenti in presenza di EV purificate e hAES depletati da EV. I risultati hanno evidenziato che gli effetti immuno-modulatori degli AES sulle NK sono mediati principalmente da fattori solubili ma anche dalle EV. Gli esperimenti qui descritti sono stati effettuati presso l’IRCCS Istituto Giannina Gaslini, Laboratorio di Terapie Cellulari, sotto la supervisione del Dr. Fabio Morandi e della Dr.ssa Irma Air

Human amnion Epithelial Cells (hAECs) pave the epithelial layer of the human amniotic membrane and can be retrieved at the end of pregnancy. Recently, hAECs have garnered interest due to their pluripotent capabilities and immune-modulatory properties and, because of these special qualities, as well as other benefits including accessibility and non-invasive application methods, without raising any ethical issues, hAECs are a great option for medical applications. hAECs exert immune-modulatory functions partly due to the production of cytokines, to the low expression of HLA A-B-C, to the presence of non-classical MHC class I molecules such as HLA-G, and of adenosinergic ectoenzymes. Also natural killer (NK) cells, acting as a bridge between innate and adaptive immunity, are essential during the pregnancy for the modulation of inflammation. Here we investigated the immune-modulatory effects of hAEC supernatants (hAES) in terms of modulation of NK cell proliferation, expression of activating/inhibitory receptors and cytotoxicity against the human K562 leukaemia and HTLA230 neuroblastoma cell lines. In this study we demonstrated that hAES had significant impact on NK cells in terms of i) inhibition of cell proliferation, ii) down-modulation of CD57, CD16, NKG2C and TIGIT, iii) up-regulation of NKG2A, NKp30, NKp44 and NKp46 and iv) increased cytotoxicity. Blocking anti-HLAG mAb significantly restored NK cell proliferation but did not affect significantly NK cell phenotype and cytotoxicity. To understand if soluble factors or extracellular vesicles (EVs) were involved in the modulation of NK cell receptors, we repeated experiments in the presence of purified EV and de-vesiculated AES. Results highlighted that the immune effects are mainly mediated by soluble factors and at least in part by EVs. The experiments here described were performed at IRCCS Istituto Giannina Gaslini, Laboratory of Cell Therapies, with the supervision of Dr. Fabio Morandi and Dr. Irma Airoldi.