Medium condizionato da cellule epiteliali amniotiche umane: effetti su vitalità, proliferazione ed apoptosi di linee cellulari tumorali

Abstract

Le cellule epiteliali amniotiche umane (hAEC) sono una popolazione cellulare di origine fetale che riveste lo strato interno della placenta umana. Queste cellule possono essere isolate in modo efficiente dalla membrana amniotica e possiedono proprietà immunomodulatorie e antinfiammatorie, con un basso profilo immunogenico. Nell’ultimo decennio, sono state proposte come potenziale strumento terapeutico per disordini congeniti e cronici. Recentemente, tali cellule hanno attirato l’attenzione come modulatori del microambiente tumorale, sebbene i meccanismi coinvolti non siano ancora del tutto noti.

Questo studio si propone di valutare gli effetti del medium condizionato da hAEC su diverse linee cellulari tumorali (HUH7, 8MGBA, IMR-32, HeLa, TFK-1), confrontandole con una linea cellulare di fibroblasti sani (BJ). I risultati ottenuti da tre serie di esperimenti condotti con medium precondizionato da hAEC su linee tumorali hanno motivato ulteriori valutazioni riguardo la fonte delle hAEC. In particolare, tutte le cellule utilizzate in questo studio sono state isolate enzimaticamente e crioconservate con soluzioni commerciali di crioconservazione. Pertanto, la variabilità delle hAEC conservate con o senza DMSO può determinare differenze nei soluti epiteliali dell’amnios. Di conseguenza, sono state effettuate analisi preliminari su diversi lotti di hAEC crioconservate con tre differenti soluzioni criogeniche, al fine di preservarne la vitalità e la funzionalità.

I risultati ottenuti forniscono indicazioni preliminari sull’attività biologica del medium condizionato sulle linee cellulari tumorali, supportando l’ipotesi che fattori solubili prodotti dalle hAEC siano in grado di modulare e influenzare la vitalità e la proliferazione cellulare. L’ottimizzazione delle condizioni post-crioconservazione rappresenta quindi un passaggio critico per la corretta funzionalità delle hAEC e per le loro applicazioni pratiche e terapeutiche.

Human amniotic epithelial cells (hAEC) are a cell population of foetal origin paving the inner layer of human placenta. Such cells can be efficiently isolated from the amniotic membrane and have immune-modulatory and anti-inflammatory properties, with a low immunogenic profile. During the last decade, these cells have been proposed as a potential therapeutic tool for congenital and chronic disorders. Recently, such cells have gained the attention as modulators of the tumour environment, although the mechanisms involved in it are not completely known. This study aims at evaluating the effects of hAEC-conditioned media on different cancer cell lines (HUH7, 8MGBA, IMR-32, HeLa, TFK-1), in comparison with one cell line of healthy fibroblasts (BJ). The results generated by three sets of experiments on hAEC-preconditioned media on cancer cell lines motivated further evaluation on the source of hAEC. Specifically, all the cells used in this study were enzymatically isolated and cryopreserved with commercial cryopreservation solutions. Thus, variability in hAEC preserved with or without DMSO may result in differences in amnion epithelial solutes. Consequently, preliminary analyses on different batches of hAECs cryopreserved with three different cryogenic solutions were performed, in order to preserve the cell vitality and function. The results obtained provide preliminary indications on the biological activity of the conditioned medium on cancer cell lines, supporting the hypothesis that soluble factors produced by hAEC are able to modulate and affect vitality and cellular proliferation. Optimising the conditions for the post-cryopreservation is then indeed a critical step for the correct functionality of hAEC and their practical and therapeutical applications.