Fenotipo M2 profibrotico nei macrofagi derivati da monociti coltivati, ottenuti dal sangue periferico di pazienti affetti da sclerosi sistemica affetti con ILD progressiva rispetto a non progressiva.

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Author
Campitiello, Rosanna <1995>
Date
2025-01-28Data available
2025-02-06Abstract
La patogenesi della sclerosi sistemica (SSc) include un ruolo importante per i macrofagi, coinvolti nella risposta immunitaria e nella progressiva fibrosi tissutale della pelle e degli organi interni, inclusi i polmoni. In particolare, i macrofagi alternativamente attivati (M2) sembrano contribuire, nella SSc, allo sviluppo della malattia polmonare interstiziale (ILD) attraverso la sintesi di molecole profibrotiche.
Obiettivi. Caratterizzare il fenotipo e i marcatori funzionali dei macrofagi M2 nei monociti circolanti e nei macrofagi derivati da monociti (MDM) coltivati da pazienti (pts) con SSc e ILD progressiva, rispetto a quelli con ILD non progressiva e senza ILD, ed esplorare i segnali profibrotici coinvolti nello sviluppo dell'ILD.
Metodi. Trentasei pazienti con SSc (età media 6513 anni; 10 con ILD progressiva, 14 con ILD non progressiva, 13 non affetti da ILD), che soddisfacevano i criteri ACR/EULAR 2013 per la SSc, e 19 controlli sani (HC) di età simile, sono stati reclutati presso la Divisione di Reumatologia Clinica delle Università di Genova e Ghent, previa approvazione del Comitato Etico e consenso informato dei pazienti. Monociti circolanti che esprimono recettori scavenger dei macrofagi (CD204, CD163), il recettore della mannosio-1 (CD206), identificanti i macrofagi M2, e il recettore toll-like-4 (TLR4, marcatore M1) sono stati rilevati tramite citometria a flusso (Navios Flow Cytometer). Per lo studio in vitro sono stati arruolati 28 pazienti con SSc (età media 6414 anni; 6 pazienti con SSc senza ILD, 10 con ILD non progressiva, 12 con ILD progressiva) e 5 HC di età simile. Tutti i monociti coltivati sono stati differenziati in MDM (phorbol myristate acetate) e mantenuti in un mezzo di crescita Roswell Park Memorial Institute per 24 ore. L'espressione genica e la sintesi proteica dei marcatori sopra menzionati, così come della tirosina chinasi Mer (MerTK), un marcatore funzionale espresso nei macrofagi M2 con intensa attività profibrotica Background. The pathogenesis of systemic sclerosis (SSc), includes important roles for macrophages that are involved in immune response and progressive tissue fibrosis of skin and internal organs, including the lungs. In particular, alternatively activated macrophages (M2) seem to contribute in SSc to the development of interstitial lung disease (ILD) through the synthesis of profibrotic molecules.
Objectives. To characterize phenotype and functional M2 markers in circulating monocytes and cultured monocyte-derived macrophages (MDMs) from SSc patients (pts) with progressive ILD compared to SSc with non-progressive ILD and without ILD, and to explore profibrotic signals involved in ILD development.
Methods. Thirty-seven SSc patients (mean age 6513 years; 10 SSc with progressive ILD, 14 SSc with non-progressive ILD, 13 not affected by ILD (no-ILD) SSc patients), fulfilling the 2013 ACR/EULAR criteria for SSc, and 19 age-matched healthy controls (HC), were recruited at the Division of Clinical Rheumatology of Genova and Ghent Universities, after obtaining Ethical Committee approval and patients’ informed consent. Circulating monocytes expressing macrophage scavenger receptors (CD204, CD163), mannose receptor-1 (CD206), identifying M2 macrophages, and toll-like receptor-4 (TLR4, M1 marker) were detected by Flow Cytometry (Navios Flow Cytometer) For the in vitro study were enrolled 28 SSc patients (mean age 6414 years; 6 no-ILD SSc patients, 10 SSc with non-progressive ILD, 12 SSc with progressive ILD and 5 age-matched HC. All cultured monocytes were differentiated into MDMs (phorbol myristate acetate) and maintained in Roswell Park Memorial Institute growth medium) for 24 hours. Gene expression and protein synthesis of the above-mentioned markers as well as Mer tyrosine kinase (MerTK), which is a functional marker expressed in M2 macrophages with intensive profibrotic activity (4), were evaluated by quantitative real-time polymerase chain reaction (PCR) and Wester