Analisi della risposta gliale in colture neuronali in presenza di cellule SH-SY5Y

Abstract

Il presente lavoro ha valutato la risposta microgliale e astrocitaria di colture primarie cortico-ippocampali in presenza della linea di neuroblastoma SH-SY5Y, per contatto diretto con corteccia o ippocampo o tramite terreno condizionato. Le colture sono state marcate mediante immunocitochimica con IBA1 (microglia) e S100β (astrociti) e acquisite mediante Image Scanning Microscopy (ISM). La percentuale di area coperta e la fluorescenza totale cellulare corretta (CTCF) sono successivamente state quantificate utilizzando Fiji e MATLAB. Nel caso di IBA1, l'area coperta è aumentata significativamente rispetto al controllo in tutte le condizioni esposte alle cellule tumorali o al terreno delle co-colture (p < 0,05), ma senza variazioni della CTCF. Per S100β non sono emerse differenze significative, sebbene si sia osservata una tendenza alla riduzione del segnale nelle condizioni di contatto diretto. I risultati indicano una risposta differenziale delle due popolazioni gliali: la microglia, prima linea di difesa del sistema nervoso centrale, reagisce sia al contatto diretto sia ai fattori solubili modificando la distribuzione spaziale del segnale, mentre la risposta astrocitaria risulta meno evidente nella finestra temporale considerata.

This work evaluated the microglial and astrocytic response of primary cortico-hippocampal cultures in the presence of the SH-SY5Y neuroblastoma cell line, either through direct contact with the cortex or the hippocampus, or through conditioned medium. Cultures were labelled by immunocytochemistry with IBA1 (microglia) and S100β (astrocytes) and acquired by Image Scanning Microscopy (ISM). The percentage of covered area and the corrected total cell fluorescence (CTCF) were then quantified using Fiji and MATLAB. For IBA1, the covered area increased significantly compared with the control in all conditions exposed to tumour cells or to co-culture medium (p < 0.05), with no change in CTCF. No significant differences emerged for S100β, although a trend towards reduced signal was observed in the direct-contact conditions. These results indicate a differential response of the two glial populations. Microglia, the first line of defence of the central nervous system, react both to direct contact and to soluble factors by changing the spatial distribution of the signal. The astrocytic response is less evident within the time window considered.