Impatto di una proteina p53 mutata sulla proliferazione cellulare e sulla risposta a PRIMA-1Met in cellule di leucemia linfatica cronica

Abstract

Tre linee cellulari di Leucemia Linfatica Cronica (LLC), caratterizzate da una diversa espressione di p53, sono state trattate con PRIMA-1Met 10 µM, una molecola sperimentale che ha come bersaglio p53. Attraverso PCR qualitative e qRT-PCR, è stata dimostrata l’assenza di segnale per TP53 nella linea p53 knockout (p53KO, definita B1) rispetto alla linea cellulare OSU-CLL, che esprime una p53 wild-type (p53WT), e alla linea cellulare MEC-1 che esprime una p53 mutata (p53MUT). I risultati delle qRT-PCR hanno evidenziato che il trattamento con PRIMA-1Met 10 µM non ha avuto un impatto significativo sull'espressione di p53 e dei geni target MDM2, CDKN1A, BCL2, a parte un aumento di espressione di BAX nella linea p53KO. L’analisi dell’espressione delle proteine ha inoltre confermato la mancanza di p53 nella linea p53KO. In seguito al trattamento con PRIMA-1Met, si è osservato un aumento della p53WT e una riduzione della p53MUT in accordo con dati recentemente ottenuti. Per quanto riguarda i target di p53, MDM2 e p21 (CDKN1A), questi hanno seguito l’andamento della proteina, con un lieve aumento nelle cellule p53WT e una leggera diminuzione nelle cellule con p53MUT, mentre nelle p53KO i loro livelli di espressione non hanno subìto variazioni dopo il trattamento.

Three Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL) cell lines, characterized by different p53 expression profiles, were treated with PRIMA-1Met at 10 µM, an experimental molecule that targets p53. Qualitative PCR and qRT-PCR analyses demonstrated the absence of TP53 signal in the p53 knockout cell line (p53KO, defined as B1) compared with the OSU-CLL cell line, which expresses wild-type p53 (p53WT), and the MEC-1 cell line, which expresses mutant p53 (p53MUT). qRT-PCR results showed that treatment with PRIMA-1Met at 10 µM did not significantly affect the expression levels of p53 or its target genes MDM2, CDKN1A, and BCL2, with the exception of an increase in BAX expression in the p53KO cell line. Protein expression analysis further confirmed the absence of p53 in the p53KO line. Following PRIMA-1Met treatment, an increase in p53WT levels and a reduction in p53MUT levels were observed, in agreement with recently obtained data. Regarding p53 target proteins, MDM2 and p21 (CDKN1A) followed the same trend as p53, showing a slight increase in p53WT cells and a modest decrease in p53MUT cells, while no changes in their expression levels were detected in p53KO cells after treatment.